A- ja B-tyypit erotteleva pikatesti influenssaviruksille |
||
|
KTL, Mikrobiologian osasto (09) 4744 8310, marjaana.kleemola@ktl.fi |
||
|
Influenssan lääkehoito "täsmälääkkeellä" on nykyään mahdollista. Amantadiini tehoaa A-tyypin viruksiin, kun taas neuraminidaasin estäjät kuten tsanamiviiri ja oseltamiviiri tehoavat sekä A- että B-tyypin viruksiin. Muihin hengitystieinfektioita aiheuttaviin viruksiin nämä eivät vaikuta, joten influenssan lääkehoitoa alettaessa tulisi olla melkoinen varmuus aiheuttajaviruksesta. Kliininen kuva ja epidemiologisen tilanteen tunteminen auttavat, mutta eivät aina riittävästi. Erilaisia pikatestejä nopean virusdiagnoosin tekemiseksi on ollut kaupan jo vuosia, ja uusia kehitellään jatkuvasti. Tähän mennessä Suomessa käytetyt influenssapikatestit joko detektoivat A- ja B-viruksen erottelematta niitä toisistaan tai jättävät B-viruksen kokonaan toteamatta. Syksyllä 2001 markkinoille on tullut kittimuotoinen laboratoriotesti, jonka avulla hengitysteiden eritteistä voi tehdä nopean A- ja B-influenssadiagnoosin melko yksinkertaisesti. Kansanterveyslaitoksen hengitystieviruslaboratoriossa kokeiltiin ja arvioitiin testiä vertaamalla sitä vakiintuneeseen virusantigeeniantigeenitestiin. Potilaat, näytteet ja menetelmätPotilaina oli sata akuuttiin hengitystieinfektioon sairastunutta varusmiestä, joilta oli otettu nenänielun imulimanäyte (NPA) virustutkimuksiin 1993 - 2001. Oireiden alkamisesta näytteen ottoon oli kulunut 2 - 3 vrk, ja näytteet oli tutkittu KTL:ssa virusantigeenien osoittamiseksi pääsääntöisesti saapumispäivänä. Menetelmänä oli koko ajan ollut vakiintunut aikaerotteinen immunofluoresenssimetodi (TR-FIA), jolla näytteistä etsittiin seitsemän hengitystieviruksen antigeeneja, mukaan lukien influenssa A ja B. Osassa tapauksista näytteistä on tehty myös influenssavirusviljely ja osassa pariseerumien vasta-aine-määrityksiä. TR-FIA-testauksen jälkeen imulimanäytteet säilytettiin pakkasessa (-70 ?C).Pikatestitutkimukseen otettiin TR-FIA-tuloksen perusteella 25 infl.A-positiivista, 25 infl.B-positiivista ja 50 negatiivista näytettä. Yksi henkilö suoritti testit BD Directigen? Flu A+B testillä (myyjä Algol) sulatetuista näytteistä valmistajan ohjeiden mukaan. Menetelmä on samanlainen kuin jo vuosia käytössä olleissa D-Flu-A- ja D-RSV-testeissä. Esikäsiteltyä imulimaa tiputetaan näytteen ohjaimen avulla testialustan kahteen kuoppaan. Kun ohjain poistetaan, näyte valuu kuopassa olevan kalvon läpi, jolloin sen valkuaiset tarttuvat kalvoon. Jatkossa tehdään kalvolle immunologinen värjäys tiputtamalla kitin reagensseja ohjeen mukaan järjestyksessä peräkkäin. Suoritus kestää yhteensä noin 15 minuuttia. Vertailutyössä yksi henkilö luki tulokset ilman tietoa aikaisemmista antigeenituloksista. Positiivinen tulos näkyy violettina kolmiona kyseisen viruksen (A tai B) kohdalla. Negatiivisessa tapauksessa näkyy vain keskellä oleva tummempi kontrollitäplä, joka osoittaa testin toimivan. TuloksetKummankin viruksen kohdalla oli kolme tapausta, joissa pikatesti antoi negatiivisen tuloksen vaikka TR-FIA oli ollut positiivinen. Testien yhtäpitävyydeksi tuli näin ollen 96 % molemmille virustyypeille. Kaikki TR-FIA-negatiiviset näytteet olivat negatiivisia myös pikatestillä. TR-FIAan verrattuna sensitiivisyys oli 88 % ja spesifisyys 100 %.Taulukko 1. TR-FIA:n ja pikatestin (Directigen Flu A+B) vertailu influenssa A:n suhteen. _________________________________________________________________________ Pikatesti ____________________ TR-FIA Lukumäärä Positiiviset Negatiiviset Positiivinen 25 22 3 Negatiivinen 50 0 50 ________________________________________________________________________ Taulukko 2. TR-FIA:n ja pikatestin (Directigen Flu A+B) vertailu influenssa
B:n suhteen.
PohdintaaTestit olivat nopeat ja jokseenkin yksinkertaiset suorittaa testipakettiin kuuluvien suomenkielisten ohjeiden avulla. Tulosten tulkinta oli myös enimmäkseen yksinkertaista, etenkin infl.A:n kohdalla, jolla nähtiin vain yksi heikosti positiivinen tulos: heikko violetti kolmio. Testin uusinta, serologia ja influenssaviljely vahvistivat positiivisen tuloksen oikeaksi. B-influenssan kohdalla heikkoja positiivisia tuloksia oli useampia. Tällaisetkin tulisi valmistajan ohjeen mukaan tulkita positiivisiksi mitä tukee niiden yhtäpitävyys positiivisen TR-FIA-tuloksemme kanssa."Väärien negatiivisten" pikatestitulosten (TR-FIA ollut positiivinen) arveltiin johtuvan näytteen säilytyksestä ja sulatuksesta, kun TR-FIA oli alunperin tehty tuoreesta näytteestä. Näin osoittautui olevankin kahdessa tapauksessa kolmesta (infl.A) ja kahdessa tapauksessa kahdesta (infl.B; yhdessä B-tapauksessa näyte oli loppunut). Kun myös TR-FIA uusittiin sulatetusta näytteestä, se jäi näissä tapauksissa negatiiviseksi. NäytetyypeistäMuita näytetyyppejä kuin nenänielun imulimaa ei tässä tutkimuksessa käsitelty. Valmistajan ohjeen mukaan myös useat muut ylä- ja ala-hengitysteiden näytetyypit voisivat tulla kyseeseen. Tikkunäytteiden (swab) ottaminen olisi yksinkertaisempaa ja potilaalle miellyttävämpää, samoin ehkä myös nenänielun huuhtelunäytteiden, mutta näiden sopivuus Directigen Flu A+B-testiin ei kuulunut tutkimukseen. Eräissä tapauksissa näytteen limaisuus voi haitata sen valumista kalvon läpi, mutta tällöin uusintatesti edelleen laimennetusta näytteestä voi selvittää tuloksen.MuutaTestin valmistajan mukaan influenssavirusten antigeeninen muuntelu ei haittaa, sillä käytetyt monoklonaalivasta-aineet kohdistuvat A- ja B-viruksen konservoituneihin nukleoproteiineihin. Testin toimivuuden osoittavassa kontrollitäplässä testialueen keskellä oleva virusantigeeni samoin kuin kitin mukana olevat erilliset kontrolliantigeenit, on valmistettu rekombinanttitekniikalla.Testin soveltuvuusParhaiten Flu A+B-testiä voi ajatella käytettäväksi sairaaloiden ja lääkäriasemien laboratorioissa, miksei myös työterveysasemilla ja terveysasemillakin. Tämänkin tutkimuksen suorittaminen tartuntatautilainsäädännön mukaisesti edellyttää kolmea asiaa: 1) lääninhallituksen myöntämää toimilupaa, 2) kliinisen mikrobiologian erikoisosaamista (voidaan hankkia esim. tukilaboratoriosta) ja 3) ulkoisen laadunarvioinnin kohdistamista tutkimukseen KTL:n antamien erityisohjeiden mukaisesti. Lisäksi testin suorittajan on oltava hyvin perehdytetty tehtäväänsä, ja olisi toivottavaa, että hän ja testin tulkitsija pysyisivät samoina kokemuksen kartuttamiseksi. Parhaimmillaan Flu A+B -testi voi auttaa valitsemaan oikeaa lääkehoitoa sitä tarvitseville influenssapotilaille sekä antamaan tietoa ympäristössä kulloinkin liikkeellä olevista influenssaviruksista.Kiitokset: Lämpimät kiitokset Anja Waromalle
testien taitavasta suorittamisesta.
|
||
|
|
||
|
|
||